Preparatet av glacial eddiksyre kan gjøres ved to metoder: kunstig syntese og bakteriell gjæring. Biosyntesemetoden, som bruker bakteriell gjæring, står for bare 10% av verdens produksjon, men det er fortsatt den viktigste metoden for produksjon av eddiksyre, spesielt eddik, fordi mange lands matsikkerhetsforskrifter krever at eddik i mat må passere den biologiske metoden. Forberedelse, og gjæringsmetode er delt inn i aerob gjæringsmetode og anaerob gjæringsmetode.
Med tilstrekkelig oksygen kan Acetobacter-bakterier produsere eddiksyre fra matvarer som inneholder alkohol. Vanligvis brukes er cider eller vin blandet med frokostblandinger, malt, ris eller poteter og moset og gjæret. Den kjemiske ligningen for gjæringsreaksjonen til disse bakteriene er:
C₂H5OH + O₂ →CHCOOH + H₂O